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高彩霞研究组发表利用CRISPR/Cas9 IVT或RNP实现小麦基因组编辑的方法文章

  文章详细阐述了通过基因枪将CRISPR/Cas9 IVTRNP导入小麦未成熟幼胚实现基因组定点修饰的DNA-free基因组编辑体系。介绍了整个流程包括CRISPR/Cas9 IVTRNP的制备、编辑活性体外及原生质体验证、基因枪幼胚转化法、突变体群体的快速筛选鉴定等具体方法和实验细节。该方法只需要9-11周即可在T0代就获得不含外源DNA的靶向修饰小麦突变体。由于IVTRNP是以瞬时表达的方式发挥作用,成功避免外源DNA整合到宿主基因组中而且大大降低脱靶效应。该DNA-free基因组编辑体系的建立将有助于进一步完善作物基因组编辑技术,推进基因组编辑育种产业化进程。 

 

  该研究成果于201821日在线发表于Nature Protocols杂志上(DOI:10.1038/nprot.2017.145)。高彩霞研究组博士生梁振和副研究员陈坤玲为该论文的并列第一作者。相关研究得到科技部、农业部、中科院以及国家自然基金委的资助。